western blot转膜恒流恒压区别？

一、western blot转膜恒流恒压区别？

western blot湿转时，用恒压还是恒流，条件是多少 western blot湿转时，一般是用恒压，当然恒流也可以 根据蛋白大小，正常的条件是80V，120分钟 如果分子量较小，可以恒流200mA，120分钟 具体使用条件可以根据western blot湿转效果再做调整

二、western blot转膜怎样转得更好看？

蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。

目前主流方法是电转印法，分为湿式转印与半干转印。

湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。

以E-Blotter湿转槽为例，一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体，将内部垂直电泳电极替换为湿转的转印芯，将胶块、滤纸、转印棉夹到转印芯内部，将槽体倒满缓冲液通电进行电转印。

半干转印是将胶块水平方向夹在半干转印槽内进行电转印。

以Yrdimes半干转印槽为例，将滤纸、转印棉用缓冲液浸润后，与胶块一起夹到转印槽内，通电进行电转印。

一般来说湿转相对半干转印速度上要慢，设备成本上半干转印槽也相对更贵。

通常小分子量的蛋白半干转效果比较好，大分子量（100KD）以上建议湿转。

三、western blot湿转原理？

western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用 在western blot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。 所以western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用

四、western blot转膜是怎么做的？

Western blot转膜是一种用于分离蛋白质的技术，主要用于检测特定的蛋白质。具体操作步骤为：将分离好的蛋白质样品通过SDS-PAGE凝胶进行电泳分离，然后将蛋白质转移到聚丙烯酰胺薄膜(或者聚乙烯脂膜)上进行固定，"膜"是由各种聚合物制成，一般使用的材料有：聚乙烯脂膜，硝酸纤维素膜，取决于试剂盒的不同。随后，使用特定的抗体识别与待检测蛋白质结合的抗原，检测特定的蛋白质。Western blot转膜技术不仅能够检测蛋白质的存在、表达量、等，还可以用来确定蛋白质的降解，修饰几率等等。

五、western blot 电泳电压如何设置？

可以有恒压或者恒流两种选择，一般情况下选择恒压的更多见。对于一般的5000bp以下的条带用1.5%的胶选择200V，电泳时间20min左右就可以了。但是对于较大的片段（5000+bp）要选择浓度1%的胶，也可以用200v，电泳约15-25min。

另外对于不同大小的dna，胶的浓度的选择比电泳参数更重要，另外要想跑的条带好看一些，要尽量让电泳的电压保持在150-200V之间，电泳的时间尽量让marker跑开就可以了。

六、什么是Western Blot？

关于这个问题，Western Blot（蛋白质免疫印迹）是一种常用的实验技术，用于检测和分析蛋白质样品中特定蛋白质的存在和数量。

Western Blot的过程通常包括以下几个步骤：

1. 蛋白质提取：从细胞或组织中提取蛋白质样品。

2. 蛋白质分离：将蛋白质样品经过电泳分离，根据蛋白质的大小将其分成不同的带状条带。

3. 转膜：将分离后的蛋白质移至膜上，通常使用聚丙烯酰胺凝胶（PVDF）或硝酸纤维素膜。

4. 封闭：将膜放入封闭液中，阻止非特异性结合。

5. 抗体探针：将特异性的抗体添加到膜上，与目标蛋白质特异性结合。

6. 洗涤：将膜洗涤以去除非特异性结合的抗体。

7. 二次抗体：加入特异性的二次抗体，该抗体与一级抗体结合。

8. 可视化：通过添加显色剂或荧光染料，观察蛋白质的特异性信号。

通过Western Blot技术，可以确定蛋白质在样品中的存在与否，以及其相对丰度。这种技术在生物医学研究中广泛应用，例如研究蛋白质表达和变化、蛋白质间相互作用等。

七、western blot电泳原理？

（本实验以转移到PVDF膜，辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法为例）在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中，不连续系统的凝胶包括浓缩胶（spacergel）和分离胶(separation gel)，蛋白质在浓缩胶中运动到两层凝胶的交界处时，由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带，即不连续系统的浓缩效应。

在凝胶中，分子量小的蛋白质泳动速度快，分子量大的蛋白质泳动速度慢，即聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应。阴离子去污剂SDS使蛋白质变性，消除不同蛋白分子间的电荷差异和结构差异，使得蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关。各种蛋白质在不连续SDS-PAGE的浓缩效应和分子筛效应的作用下，按照分子量大小以一定顺序排列形成一个个区带。

八、western-blot是什么？

Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。Western Blot显色的方法主要有以下几种：　　i. 放射自显影　　ii. 底物化学发光ECL　　iii. 底物荧光ECF　　iv. 底物DAB呈色值得一提的是，western blot 这个名称的由来很有意思。最开始做印迹工作的是一个叫做Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southern blot，后来类似的出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为Northern和Western，与这两个技术的发明人没有关系了。

九、关于WESTERN BLOT的内参？

肯定要加二抗啊，内参和你的目的蛋白是一样的，也是一个蛋白，只不过表达比你的目的蛋白在各个组织之间恒定许多，它是你的目的蛋白的一个参照，但是它的作用和mark还不一样，所以内参是一定要要的，否则，人家会质疑你实验的可信性。

如果你的实验动物是大鼠，打个比方一抗是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的，二抗就是什么抗兔的，比如说羊抗兔之类，一抗最好买国外的，二抗国内的就可以了

十、western blot是什么实验？

western blot是一种非常经典的定性、定量检测蛋白表达的方法。其原理通俗来说：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质是被检测物,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。