pvdf膜转膜的原理？

一、pvdf膜转膜的原理？

western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用 在western blot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。

封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。

所以western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用

二、印迹转膜原理？

蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是电转印法，分为湿式转印与半干转印。

湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。

以E-Blotter湿转槽为例，一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体，将内部垂直电泳电极替换为湿转的转印芯，将胶块、滤纸、转印棉夹到转印芯内部，将槽体倒满缓冲液通电进行电转印。

半干转印是将胶块水平方向夹在半干转印槽内进行电转印。

以Yrdimes半干转印槽为例，将滤纸、转印棉用缓冲液浸润后，与胶块一起夹到转印槽内，通电进行电转印。

一般来说湿转相对半干转印速度上要慢，设备成本上半干转印槽也相对更贵。

通常小分子量的蛋白半干转效果比较好，大分子量（100KD）以上建议湿转。

三、wb转膜原理？

电场力作用条件下，带电粒子（PAGE胶中的蛋白）会发生定向迁移；

蛋白大小如果超过膜孔径（0.22μm or 0.45μm），不会透过膜；

WB用的膜具有蛋白吸附作用。

四、电动封膜机上膜转不停？

首先你得确定封口机有没有损坏，如果没有损坏的话，你在用封口机封口之前，要对机器进行预热，大概要3到5分钟，如果天气冷的时候，可能预热的时间更长。

另外，封口机上面的温度调节开关是不是打在了合适的位置，如果封口膜比较厚，要把温度调高一点。还有，这个封口的速度，跟封口机的质量也是挂钩的。

五、PE转印膜如何转印？

1.了解热转印膜 热转印膜是将图案预先印刷在PET膜表面,在加热于压力的共同作用下,图文脱离开载体膜,牢固转移附着于承印物表面的特殊印刷膜。

2.使用热转印膜 1.可打印刻字膜 2.专色刻字膜 3.烫画

3.热转印膜注意事项 在烫印的时侯注意烫印“三原则”,烫印三原则是指:温度、压力、时间这三个老生常谈的要素。温度起到热熔胶溶解、粘合的作用,压力便于刻字膜与承印物的融合。

六、转膜液的配制？

转膜缓冲液的基础配方是Tris，甘氨酸和甲醇，这个没有疑问。 加不加SDS有两种说法 一种认为尽量不要加，因为加了之后SDS会影响转印效果，导致最终实验失败。只有在分子量较大的情况下（大于120KDa），浓度控制在0.01%之内。 一种认为任何情况下都要加，因为加了之后SDS可以消除电荷的影响，转印的结果不会受到影响。浓度可以在0.01%~0.1%之间。 所以可以用两种缓冲液都试一下，哪个效果好就用哪种。

转膜缓冲液的配制方法：39mM glycine 2.9g,48mM tris 5.8g, SDS 0.37g 加入600ml去离子水，充分搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至800ml后，加入200ml甲醇。室温保存。

七、镭射转印膜原理？

热转印的原理在于将图案或文字预先印刷到基材薄膜上，通过热和压力的作用，再将印刷层的图文转移到承印物上面，现有的热转印膜往往设计简单，转印出来的图案很普通，无法提高承印物的色彩效果，不能够起到良好的装饰作用。

一种镭射热转印膜，包括底膜层，所述的底膜层的上侧面上设有印刷层，所述的印刷层的上侧面上设有中间膜层，所述的中间膜层上分布有若干通孔，所述的中间膜层的上侧面上设有镭射层，所述的通孔内填充有透明的固化树脂，还包括保护层，所述的保护层设置在镭射层的上侧面上。

八、木门转印膜清理？

有以下几个方法清理：

1、面积不大，可以用香蕉水涨一下，再用清洁球一擦就没了。

2、用纺织工业用清洗剂（瓶装叫A1)可去除。

3、用硫酸掺水，不然会腐蚀，泡完用清洁球一擦。

4、电吹风吹热，再揭或用木铲铲，胶痕可用溶剂油擦掉。希望我的回答能够帮助到您。

九、半干转膜原理？

最近在做转膜，本人蛋白50kd左右，用的bio-red半干转膜仪，转膜缓冲液用是39mM甘氨酸，48mM Tris，20%甲醇，ＰＶＤＦ膜，严格按照转膜操作进行的，恒压１２Ｖ的话，电流一开始就过小，只有０.０２Ａ，功率直接显示为零，转膜半小时都转不过去。今天试了恒流转，用了０.０３Ａ的电流，电压慢慢上升快超过２５Ｖ，后来改用０.０２Ａ的电流，电压最大的时候达到２２Ｖ。但是染色还是没有条带。预染marker基本上转过去了。将转过后的胶重新染色，胶上很明显的有我的蛋白。

十、电转膜的原理？

转膜实验原理与操作步骤

转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定，是进行各种后续研究(如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。

实验目的：

掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤

实验原理：

1. 转膜的方式：

向上的毛细管转移

向下的毛细管转移

同时向两张膜转移

电转移

真空转移

2. 固相支持物的种类及选择：

硝酸纤维素膜：非共价结合，易脆，易丢失DNA ， < 500 bp 的DNA 无效，转膜前的工作(从提高转膜效率，利于转膜后使用等)。

尼龙膜(带正电荷的)高强度，不易破损，具有较大的DNA 结合容量，它能够吸附变性DNA ，核酸以共价结合方式不可逆的结合在尼龙膜上。尼龙膜两边均有吸附DNA 的功能，无论用哪边均可以经久耐用，可反复利用 10 次以上( 10-20 次)，经毛细管(毛细吸附)作用，把DNA 从凝胶上转到膜上。DNA 转到膜上是复制胶上的带型，在 80-100 ℃真空干燥 2-4 hrs ，即可固定DNA 。

3. 转移缓冲液( transfer buffer )的选择：

带正电荷的尼龙膜：可用高盐离子强度( SSC )，但不能充分发挥膜潜能; 0.4N NaOH ，共价结合DNA 是最大优点。

硝酸纤维膜：高盐离子强度促进DNA 与膜结合( 20 × SSC )，低盐离子强度导致小片段DNA 在转移过程中丢失， pH>9 ，DNA 不能与膜结合。

4. 转膜时间( duration of transfer )约 12 hrs。

取决于毛细管系统，DNA 大小，胶厚度 (<5 mm) 及浓度 (<1%) 。

DNA 分子量大小决定时间长短，部分去嘌呤减小DNA ，碱转移 2hrs 大部分结合到膜。

DNA 转移的效率较难判断，只有在转膜结束后，通过 EB 染胶，及分子杂交才可以鉴别效率高低，但已无补救措施，因此，每一步应严格操作。

实验材料及试剂： 酶消化好的DNA 样品，尼龙膜， 0.2NHCl ， 0.4N NaOH 等。